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石蠟切片粘附載玻片的處理
1 、載玻片的處理 :
抗原修複過程中 ,由於高溫 、高壓 、輻射等諸多因素的影響 ,極易造成脫片 。為保證試驗的正常進行 ,可選用我公司提供的zli-9001 apes 、zli-9003 histogriptm或zli-9005 poly-l-lysine等幾種試劑 ,對已清洗的載玻片進行處理 。具體方法如下 :elisa試劑盒
1.1 apes :現用現配 。將洗淨的玻片放入以1:50比例丙酮稀釋的apes中,停留20~30秒鍾 ,取出稍停片刻 ,再入純丙酮溶液或蒸餾水中涮去未結合的apes ,置通風櫥中晾幹即可 。用此載玻片撈片時應注意組織要一步到位 ,並盡量減少氣泡的存在 ,以免影響染色結果 。
1.2 histogriptm :將洗淨的玻片放入以1:50比例丙酮稀釋的histogrip液中 ,停留1~2分鍾 ,然後用雙蒸水快速清洗三次 ,室溫幹燥或60oc烤箱烘烤一小時 ,裝盒備用 。
1.3 poly-l-lysine :將洗淨 、幹燥的載玻片放入以1:10比例去離子水稀釋的多聚賴氨酸溶液中 ,浸泡5分鍾 ,60oc烤箱烘烤一小時或室溫過夜幹燥 。裝盒備用。試驗中使用的器具均為非玻璃製品 。elisa試劑盒
2 、常用酶消化 :
2.1 胰蛋白酶 :一般使用濃度為0.05%~0.1% ,消化時間為37℃ 、10~40分鍾 ,主要用於細胞內抗原的顯示 。
2.2 胃蛋白酶 :一般使用濃度為0.4% ,消化時間為37℃ 、30~180分鍾 ,主要用於細胞間質抗原的顯示 ,如 :laminin(層粘蛋白) ,collagen iv(iv型膠原)等 。
2.3 皂素(saponin) :一般使用濃度為2~10 g/ml的saponin溶液 ,消化時間為室溫孵育30分鍾 。